一、细胞样品收集方法——蛋白

 

以T75培养瓶为例

 

1、把培养上清彻底转移至50或15ml离心管中，用PBS洗涤1-2次（PBS需彻底吸干，洗液时把板倾斜），每次洗涤时，均需把PBS转移到同一个50或15ml离心管，每培养瓶细胞准备一个离心管，切勿混淆。

 

2、每培养瓶加入300ul RIPA裂解液（加入裂解液时，一定用放平，是细胞与裂解液充分接触）, 把上述离心管离心（水平转角离心机，1000RPM, 8min）,彻底移除上清，加入300ul RIPA裂解液，吹打12下后，把裂解液转移至同一培养瓶中，则培养瓶中合并有200ul，盖好盖子，用封口膜封口后置于-80℃保存；注意做好标记！

 

（如果用PBS洗涤后，细胞未飘起，则把600ul RIPA裂解液直接加入培养瓶）

 

二、组织样本收集注意事项——组织

 

1、一般组织：

（1）如果已经把组织剪碎后放置于研磨管中，把装有组织的管子置于干冰上，把RIPA裂解液和研磨珠（1大，3中，6小）加入管子中；

 

然后置于组织研磨仪进行研磨（28次/秒，研磨两次，每次5分钟，两次之间应把组织用干冰或液氮冻结，研磨前和研磨后的样品运输均需干冰运输），最后把裂解液收集到EP管中，然后用枪头催打至少12下（剪切基因组DNA）；

 

（2）如果未能事先收取组织，请把装有组织的管子置于干冰上，绝对避免复温，根据实验的需要，用手术器械取适量组织后放置于研磨管中并立即剪碎（置于干冰上），把RIPA裂解液和研磨珠（1大，3中，6小）加入管子中；

 

然后置于组织研磨仪进行研磨（28次/秒，研磨两次，每次5分钟，两次之间应把组织用干冰或液氮冻结，研磨前和研磨后的样品运输均需干冰运输），最后把裂解液收集到EP管中，最后用枪头催打至少12下（剪切基因组DNA）。

2、特殊组织：

对如骨头，软骨，皮肤，筋健，这些难以用组织研磨仪研磨的组织，请把装有组织的管子置于干冰上，绝对避免复温，根据实验的需要，用手术器械取适量组织。

 

然后放置于研钵中，立即加入液氮把组织冻结，然后按照一定的技巧把组织成粉末状（在整个研磨过程中，绝对避免组织复温，应及时添加液氮，以使组织保存冻结状态）。

 

这时快速加入RIPA裂解液，并快速研磨几下，待RIPA裂解液冻融后，再研磨几下，用移液枪吸取RIPA裂解液，把研磨棒，研钵壁上的组织岁末催打下来，然后把裂解液收集到EP管中，最后用枪头催打至少12下（剪切基因组DNA）。

 

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